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如何使用酶底物法程控定量封口机

51孔和97定量盘操作说明

51孔和97孔定量盘灭菌消毒

定量盘与DST酶底物法配合使用,定量检测100ml水中微生物,将DST-酶底物法试剂与检测水样混合后加入到51孔或者97孔定量盘中,使用程控定量封口机封膜,根据检测不同项目的培养温度和时间进行培养(24H),数出显阳性的孔格,对照MPN表读结果。

如何使用酶底物法程控定量封口机(图1)

【工作原理】

加入含有总大肠菌群细菌的水样,目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃±1℃培养,总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色;同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG,产生特征性荧光。同样原理,耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养基呈现黄色。

【使用方法】

定性测试:

第一步、在100ml水样中加入试剂,溶解,36℃±1℃培养24h;

第二步、结果判读

        无色=阴性

        黄色=总大肠菌群阳性

        黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性

注:耐热大肠群菌(粪大肠菌群)需44.5℃培养24h后,观察黄色为阳性

定量检测

第一步、在100ml水样中加入试剂,溶解;

第二步、倒入51孔定量检测盘(定量孔板)或97孔定量检测盘(定量孔板)中;

第三步、用程控定量封口机对定量检测盘(定量孔板)进行封膜,36 ℃±1℃培养24h;

第四步、定量检测盘(定量孔板)结果判读:

        无色=阴性

        黄色格子=总大肠菌群阳性

黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性

查对照MPN表计数

注:耐热大肠群菌(粪大肠菌群)需44.5℃培养24h后,观察黄色格子为阳性结果,查对照MPN表计数。


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